13651923355
技術(shù)文章
液相色譜系統(tǒng)的許多問題都可以在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變?cè)O(shè)備參數(shù)得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對(duì)于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵所在。
A、峰拖尾
原因 | 解決辦法 |
1、篩板阻塞 | a、反沖色譜柱 b、更換進(jìn)口篩板 c、更換色譜柱 |
2、色譜柱塌陷 | 填充色譜柱 |
3、干擾峰 | a、使用更長(zhǎng)的色譜柱 b、改變流動(dòng)相或更換色譜柱 |
4、流動(dòng)相PH選擇錯(cuò)誤 | a、調(diào)整PH值。對(duì)于堿性化合物，低PH值b、更有利于得到對(duì)稱峰。 |
5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應(yīng) | a、加入離子對(duì)試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑 b、更改色譜柱 |
B、峰前延
原因 | 解決辦法 |
1、柱溫低 | 升高柱溫 |
2、樣品溶劑選擇不恰當(dāng) | 使用流動(dòng)相作為樣品溶劑 |
3、樣品過載 | 降低樣品含量 |
4、色譜柱損壞 | 見A1、A2 |
C、峰分叉
原因 | 解決辦法 |
1、保護(hù)柱或分析柱污染 | 取下保護(hù)柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強(qiáng)保留物質(zhì)污染，運(yùn)用適當(dāng)?shù)拇胧Ｈ绻麊栴}仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。 |
2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相 | 改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。 |
D、峰變形
原因 | 解決辦法 |
1、樣品過載 | 減少樣品載量 |
E、早出的峰變形
原因 | 解決辦法 |
1、樣品溶劑選擇不恰當(dāng) | a、減少進(jìn)樣體積 b、運(yùn)用低極性樣品溶劑 |
F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
原因 | 解決辦法 |
1、柱外效應(yīng) | a、調(diào)整系統(tǒng)連接（使用更短、內(nèi)徑更小的管路） b、使用小體積的流通池 |
G、K’增加時(shí)，脫尾更嚴(yán)重
原因 | 解決辦法 |
1、二級(jí)保留效應(yīng)，反相模式 | a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品） d、更換一支柱子 |
2、二級(jí)保留效應(yīng)，正相模式 | a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入水（或多官能團(tuán)化合物） d、試用另一種方法 |
3、二級(jí)保留效應(yīng)，離子對(duì) | 加入三乙胺（或堿性樣品） |
H、酸性或堿性化合物的峰拖尾
原因 | 解決辦法 |
1、緩沖不合適 | a、使用濃度50-100mM的緩沖液 b、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液 |
I、額外的峰
原因 | 解決辦法 |
1、樣品中有其他組份 | 正常 |
2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰 | a、增加運(yùn)行時(shí)間或梯度斜率 b、提高流速 |
3、空位或鬼峰 | a、檢查流動(dòng)相是否純凈 b、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑 c、減少進(jìn)樣體積 |
J、保留時(shí)間波動(dòng)
原因 | 解決辦法 |
1、溫控不當(dāng) | 調(diào)好柱溫 |
2、流動(dòng)相組分變化 | 防止變化（蒸發(fā)、反應(yīng)等） |
3、色譜柱沒有平衡 | 在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱 |
K、保留時(shí)間不斷變化
原因 | 解決辦法 |
1、流速變化 | 重新設(shè)定流速 |
2、泵中有氣泡 | 從泵中除去氣泡 |
3、流動(dòng)相選擇不恰當(dāng) | a、更換合適的流動(dòng)相 b、選擇合適的混合流動(dòng)相 |
L、基線漂移
原因 | 解決辦法 |
1、柱溫波動(dòng)。（即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類檢測(cè)器。） | 控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器
|
2、流動(dòng)相不均勻。（流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。） | 使用HPLC級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。 |
3、流通池被污染或有氣體 | 用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸） |
4、檢測(cè)器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線） | 取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。 |
5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化 | 更改配比或流速。為避免這個(gè)問題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。 |
6、柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí) | 用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。 |
7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成 | 檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑 |
8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。 | 使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。 |
9、使用循環(huán)溶劑，但檢測(cè)器未調(diào)整。 | 重新設(shè)定基線。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相。 |
10、檢測(cè)器沒有設(shè)定在大吸收波長(zhǎng)處。 | 將波長(zhǎng)調(diào)整至大吸收波長(zhǎng)處 |
M、基線噪音（規(guī)則的）
原因 | 解決辦法 |
1、在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣 | 流動(dòng)相脫氣。沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。 |
2、漏液 | 見第三部分。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。 |
3、流動(dòng)相混合不* | 用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑 |
4、溫度影響（柱溫過高，檢測(cè)器未加熱） | 減少差異或加上熱交換器 |
5、在同一條線上有其他電子設(shè)備 | 斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。 |
6、泵振動(dòng) | 在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器 |
N、基線噪音（不規(guī)則的）
原因 | 解決辦法 |
1、漏液 | 見第三部分。檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。 |
2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成 | 檢查流動(dòng)相的組成。 |
3、流動(dòng)相各溶劑不相溶 | 選擇互溶的流動(dòng)相 |
4、檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問題 | 斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源，檢查并更正。 |
5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡 | 用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng) |
6、檢測(cè)器內(nèi)有氣泡 | 清洗檢測(cè)器，在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器 |
7、流通池污染（即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音。） | 用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池 |
8、檢測(cè)器燈能量不足 | 更換燈 |
9、色譜柱填料流失或阻塞 | 更換色譜柱 |
10、流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常 | 維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置 |
O、寬峰
原因 | 解決辦法 |
1、流動(dòng)相組成變化 | 重新制備新的流動(dòng)相 |
2、流動(dòng)相流速太低 | 調(diào)節(jié)流速 |
3、漏液（特別是在柱子和檢測(cè)器之間） | 見section 3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。 |
4、檢測(cè)器設(shè)定不正確 | 調(diào)整設(shè)定 |
5、柱外效應(yīng)影響 a、柱子過載 b、檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)時(shí)間或池體積響應(yīng)過大 c、柱子與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)或管路內(nèi)徑太大 d、記錄儀響應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng) | a、小體積進(jìn)樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀釋樣品 b、減少響應(yīng)時(shí)間或使用更小的流通池 c、使用內(nèi)徑為0.007-0.01的短管路 d、減少響應(yīng)時(shí)間 |
6、緩沖液濃度太低 | 增加濃度 |
7、保護(hù)柱污染或失效 | 更換保護(hù)柱 |
8、色譜柱污染或失效，塔板數(shù)較低 | 更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對(duì)稱的色譜峰，則用強(qiáng)溶劑沖洗舊柱子。 |
9、柱入口塌陷 | 打開柱入口，填補(bǔ)塌陷或更換柱子 |
10、呈現(xiàn)兩個(gè)或多個(gè)未被*分離的物質(zhì)的峰 | 選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果 |
11、柱溫過低 | 提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過75℃ |
12、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大 | 使用較小的時(shí)間常數(shù) |
P、分離度降低
原因 | 解決辦法 |
1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間變化） | 重新配置流動(dòng)相 |
2、保護(hù)柱或分析柱阻塞 | 去掉保護(hù)柱進(jìn)行分析。如果必要?jiǎng)t更換保護(hù)柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強(qiáng)保留的污染物損壞，建議使用恰當(dāng)?shù)某绦颉Ｈ绻麊栴}仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。 |
Q、所有的峰面積都太小
原因 | 解決辦法 |
1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過高 | 減少衰減的設(shè)定 |
2、檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)設(shè)定太大 | 設(shè)定較小的時(shí)間常數(shù) |
3、進(jìn)樣量太少 | 增大進(jìn)樣量 |
4、記錄儀連接不當(dāng) | 使用正確的連接 |
R、所有的峰面積都太大
原因 | 解決辦法 |
1、檢測(cè)器衰減設(shè)定過低 | 采取較大的衰減 |
2、進(jìn)樣過多 | 減少進(jìn)樣量 |
3、記錄儀連接不正確 | 正確連接記錄儀
|
文章來源：EWG1990儀器學(xué)習(xí)網(wǎng)
掃碼加微信