生物惰性液相質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)提升寡核苷酸定量分析性能

樣品流路中分析物與金屬表面相互作用引起的金屬吸附是寡核苷酸分析中的主要問題之一。使用傳統(tǒng)的 LC系統(tǒng)（基于不銹鋼材質(zhì)）通常會(huì)導(dǎo)致峰形不佳、靈敏度和定量性能受損。

本文介紹了使用為解決金屬吸附問題而開發(fā)的 Nexera XS inert系統(tǒng)分析寡核苷酸的示例。對(duì)靈敏度、定量性能和殘留進(jìn)行了評(píng)估，結(jié)果顯示，與在流路中使用不銹鋼的 HPLC 系統(tǒng)相比，該生物惰性系統(tǒng)在整體性能上明顯改善。Nexera XS inert系統(tǒng)對(duì)金屬配位化合物表現(xiàn)出優(yōu)異的分析性能。

通常用于 HPLC 流路的不銹鋼 (SUS) 具有出色的耐壓性，但含有磷酸基團(tuán)的化合物可以通過金屬配位作用與潤(rùn)濕不銹鋼表面吸附。金屬吸附會(huì)對(duì)峰形、檢測(cè)靈敏度和重現(xiàn)性產(chǎn)生負(fù)面影響，并降低定量分析的性能。一般通過重復(fù)注入高濃度樣品來抑制吸附，但這種方法既費(fèi)時(shí)又昂貴。另一種方式是使用含有螯合劑的溶液來抑制吸附。但是此方法不適用于 LC/MS 分析，因?yàn)樗赡軐?dǎo)致污染和靈敏度降低。

為了評(píng)估金屬吸附抑制效果，采用常規(guī)HPLC系統(tǒng)（Nexera XR）和生物惰性UHPLC系統(tǒng)（Nexera XS inert）進(jìn)行分析，并分別使用不銹鋼色譜柱和無金屬色譜柱。寡核苷酸的反相色譜分析中通常采用離子對(duì)試劑，本實(shí)驗(yàn)中使用HFIP和DIPEA（N, N-二異丙基乙胺）。

樣品信息：

序列：5'-dG-dC*-dC*-dT-dC*-dA-dG-dT-dC*-dT-dG-dC*-dT-dT-dC*-dG-dC*-dA-dC* -dC*-3'，(*) 表示 5-C 或 5-U 甲基化  (d) 2'-脫氧核苷

分子量：6431.72

色譜及質(zhì)譜條件：略。

圖 1 顯示了使用 Nexera XR 和不銹鋼色譜柱以及 Nexera XS inert和無金屬色譜柱分析的 10 ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)寡核苷酸溶液的色譜圖。與 Nexera XR 相比，Nexera XS inert 的峰強(qiáng)度增加了約 1.7 倍。

圖1 寡核苷酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(10 ng/mL)的MRM色譜圖

圖2 (a) Nexera XR，(b)Nexera XS inert 交叉污染比較

分析濃度為1000 ng/mL的寡核苷酸溶液后，立即將樣品溶劑水作為空白進(jìn)樣以評(píng)估殘留情況。圖2（a）顯示了Nexera XR空白分析的色譜圖，圖2（b）顯示了Nexera XS inert空白分析的色譜圖，可以看到兩者的殘留水平分別為0.0790%和0.0033%。這些結(jié)果表明，Nexera XS inert系統(tǒng)顯著抑制了金屬吸附并最大限度地減少了交叉污染。

樣品流路中分析物與金屬表面相互作用引起的金屬吸附是寡核苷酸以及其他金屬敏感化合物分析中的主要問題之一。Nexera XS inert在樣品接觸流路中使用生物惰性材料，對(duì)易被吸附的化合物具有出色的峰形、分離度、靈敏度、重現(xiàn)性和定量性能。而且，該系統(tǒng)耐壓超過100MPa，適用于超快速分析，顯著提高實(shí)驗(yàn)室分析通量。

Nexera XS inert系統(tǒng)與MS的結(jié)合是分析金屬敏感化合物的理想解決方案。

本應(yīng)用中使用的儀器（Nexera XS inert+LCMS-8060）

參考文獻(xiàn)：

1、LCAV-0001-0274，Improvement of Quantitative Performance in LC/MS Analysis of Oligonucleotides using Nexera XS inert